Real Taq DNA Polymerase
● 儲(chǔ)存條件:-20℃ 保存
● 濃 度: 5 U/ml
● 產(chǎn)品簡介
Real Taq
DNA Polymerase是從克隆有Thermu aquaticus DNA Polymerase基因的大腸桿菌經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)后分離純化的，其分子量為94 KD。具有5’-3’DNA聚合酶活性和5’-3’外切核酸酶活性，無3’-5’外切酶活性。在PCR反應(yīng)中，Real Taq DNA Polymerase延伸速度為1-2 kb/分鐘，產(chǎn)物3’端帶A，可直接用TA載體克隆。
● 活性定義
1單位(U) Real Taq DNA Polymerase活力定義為在74℃、30分鐘內(nèi)，以活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，將10 nmol脫氧核苷酸摻入到酸不溶物質(zhì)所需的酶量。
● 酶貯存緩沖液
20 mM Tris-HCl (pH 8.0);0.1 mMEDTA;1 mMDTT;100 mMKCl ; Stabilizers; 50% glycerol
● 10×Taq Buffer
200
mM Tris-HCl (pH 8.4);200
mMKCl;15 mMMgCl2; 其它成分。
● 適用范圍
一般用于DNA片段的PCR擴(kuò)增、DNA標(biāo)記、引物延伸、序列測定、平末端加A等，產(chǎn)物可以直接用于T/A載體克隆。
● 反應(yīng)舉例：
注意：以下舉例為常規(guī)PCR反應(yīng)系統(tǒng)，僅供參考。實(shí)際反應(yīng)條件因模板、引物等的結(jié)構(gòu)不同而各異，需根據(jù)模板、目的片段的大小、堿基序列和引物長短等具體情況，設(shè)定最佳反應(yīng)條件。
以人基因組DNA為模板，擴(kuò)增1 kb的片段
1. 反應(yīng)體系的建立：50 ml反應(yīng)體系如下(可根據(jù)比例放大或縮小反應(yīng)體系)：
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Template
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<1mg
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Primer
1（10 mM）
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1 ml
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Primer
2（10 mM）
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1 ml
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10×Taq Buffer
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5 ml
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dNTP
Mixture(10 mM)
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1 ml
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Taq
(5 U/ml)
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0.5 ml
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ddH2O
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補(bǔ)至 50 ml
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2. PCR反應(yīng)循環(huán)的設(shè)置：
94℃ 3 min
94℃ 30 sec
55℃ 30 sec 30
cycles
72℃ 1 min
72℃ 5 min
3. 結(jié)果檢測：反應(yīng)結(jié)束后取5 ml反應(yīng)產(chǎn)物，瓊脂糖凝膠電泳檢測。