RealECL發(fā)光液 Ver.740574
● 產(chǎn)品組成:
貨號
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名稱
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規(guī)格
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保存條件
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EC2520-01
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RealECL發(fā)光液
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25 ml
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2-8℃
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EC2520-02
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RealECL發(fā)光液
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100 ml
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2-8℃
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EC2520-03
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RealECL發(fā)光液
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500 ml
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2-8℃
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說明書
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一份
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● 產(chǎn)品簡介:
RealECL 是一種超敏ECL化學發(fā)光試劑盒,可與二抗上耦連的辣根過氧化物酶(HRP)發(fā)生化學反應,發(fā)出熒光,從而可以通過用X光片壓片或其它適當熒光成像設備檢測樣品。RealECL具有極高靈敏度和高信噪比,可檢測出10-100 fg的微量抗原;發(fā)光迅速,熒光可使X感光膠片感光達1小時以上,特別適用于痕量蛋白檢測;另外高靈敏度可以大大節(jié)省寶貴的樣品以及非常昂貴的一抗和二抗的用量,降低實驗成本。
● 貯存、運輸及效期:
2-8℃貯存;有效期一年;濕冰運輸。
● 注意事項:
1. RealECL A液和B液在吸取過程中必須要更換槍頭,A液和B液相互污染后會導致A液或B液逐漸失效,影響后續(xù)的使用效果。
2. 各溶液使用后,請蓋緊瓶蓋,以防失效。
3. 為獲得最佳實驗結果,請務必優(yōu)化實驗條件,包括檢測樣品的用量、一抗、二抗稀釋度、雜交膜及封閉試劑的選擇。
4. 由于疊氮鈉是HRP抑制劑,在緩沖液中應避免使用疊氮鈉作為防腐劑;如果二抗中含有疊氮鈉,發(fā)光實驗前要進行5次TBST或PBST漂洗,每次10分鐘。
5. 在與膜發(fā)生接觸過程中,請佩戴手套且使用干凈鑷子等潔凈器材,避免蛋白污染產(chǎn)生高背景。
● 使用說明:
1. RealECL工作液的配制:等體積混合適量RealECL A液和B液,常溫放置備用。工作液宜在臨檢測前配制。
2. Western二抗孵育后,進行數(shù)次洗滌,用平頭塑料鑷子將膜取出,用濾紙略吸去過多的液體(切勿接觸膜的蛋白面),但不要使膜過度干燥,然后將膜平鋪于一潔凈保鮮膜上,避免產(chǎn)生氣泡。
注:某些市售保鮮膜包裹印跡膜時會淬滅熒光,請選擇ECL專用保鮮膜獲得更好的實驗效果。
3. 根據(jù)膜的大小,按每平方厘米膜加0.125 ml RealECL工作液的比例,滴加RealECL工作液到膜上,確保使工作液均勻覆蓋在膜上,常溫放置1-2分鐘。
注:為達節(jié)約目的可將膜減小但勿降低發(fā)光液用量,確保發(fā)光液完全覆蓋于膜上。
4.將保鮮膜折起來完全包裹雜交膜,去除氣泡和皺褶,可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發(fā)光工作液。
5.可以使用ECL發(fā)光檢測儀器或暗室曝光。用膠帶將覆蓋雜交膜的保鮮膜固定在暗盒內,在黑暗中放入X感光膠片,分別曝光不同的時間如數(shù)秒到數(shù)分鐘,顯影定影觀察沖洗結果。如掌握不好曝光時間,可以在膜上放置3-4張X感光膠片,統(tǒng)一曝光3-5分鐘,顯影后選擇一張曝光最好的膠片。
應用示例:
綠蘿總蛋白,RbcL一抗 1:2000,羊抗兔IgG-HRP 1:2000
a PVDF膜用抗體清除液處理后再用RealECL曝光。