核酸快速高靈敏度染色試劑盒
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產(chǎn)品編號(hào)
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規(guī)格
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貯存
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RTS5101
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25次
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常溫
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● 儲(chǔ)存、運(yùn)輸及效期
常溫保存；常溫運(yùn)輸；有效期一年。
● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
核酸快速高靈敏度染色試劑盒(Fast and High Sensitivity Stain Kit
for Nucleic Acids)是一種快速簡(jiǎn)單、可用于聚丙烯酰胺凝膠中的核酸檢測(cè)的試劑盒。該方法檢測(cè)靈敏度比 EB 高達(dá) 200 倍，能檢測(cè)到10ng的 DNA條帶，常用于檢測(cè) SSR 標(biāo)記、SNP 標(biāo)記等。
本試劑盒可足夠用于25塊常規(guī)的8×10cm凝膠的染色。
說明書后附有實(shí)驗(yàn)記錄表格，方便記錄實(shí)驗(yàn)步驟。
● 產(chǎn)品組成：
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產(chǎn)品編號(hào)
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產(chǎn)品名稱
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規(guī)格
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貯存
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RTS5101-1
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試劑A-增敏液（10×）
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250 ml
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常溫
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RTS5101-2
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試劑B-加速液（10×）
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250 ml
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常溫
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RTS5101-3
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試劑C-染色溶液(100×)
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26 ml
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常溫，避光
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RTS5101-4
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試劑D-基本顯色液(10×)
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250 ml
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常溫
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RTS5101-5
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試劑E-顯色加速液(500×)
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5 ml
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常溫，避光
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● 注意事項(xiàng)：
1. 由于染色非常靈敏，操作時(shí)請(qǐng)注意盡量使用高純度的水，并確保所使用的器皿非常清潔，最好使用潔凈的玻璃器皿。操作時(shí)必須戴手套，避免皮膚和凝膠直接接觸。
2. 需自備無水乙醇及MilliQ級(jí)純水。
3. 下述使用說明中各種溶液的使用量適用于大小為8×10cm厚度為0.75-1mm的凝膠。對(duì)于更大的凝膠，各種溶液的使用量需按凝膠面積的比例放大，對(duì)于更厚的凝膠，作用時(shí)間需按照厚度的比例適當(dāng)延長(zhǎng)。
4. 本說明書所指的常溫溫度為20-25℃，操作溫度較低時(shí)由于溶液的擴(kuò)散能力下降，各步驟需適當(dāng)延長(zhǎng)時(shí)間。
5. 基本顯色液(10×)在低溫環(huán)境下可能會(huì)出現(xiàn)沉淀，可在37℃水浴中溶解，并充分混勻后使用。
● 使用方法：
一. 漂洗步驟：
電泳結(jié)束后，凝膠中加入100 ml MilliQ級(jí)純水，在搖床上常溫?fù)u動(dòng)2分鐘，搖動(dòng)速度為60-70rpm；重復(fù)此步驟1次。
二. 染色步驟：
2.1 染色：
棄水，加入100 ml即用型染色液，在搖床上常溫?fù)u動(dòng)5分鐘，搖動(dòng)速度為60-70 rpm。
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即用型染色液配制量 100 ml
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超純水
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79 ml
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試劑A-增敏液（10×）
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10 ml
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試劑B-加速液（10×）
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10 ml
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試劑C-染色溶液(100×)
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1 ml
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注：即用型染色液配制后需在20分鐘內(nèi)使用。
2.2 水洗滌：
棄原有溶液，加入100 ml MilliQ級(jí)純水或雙蒸水，在搖床上室溫?fù)u動(dòng)15-20秒，搖動(dòng)速度為60-70rpm。
注意：水洗滌的時(shí)間不能超過20秒。
三. 顯色步驟：
棄水，加入100 ml顯色液，在搖床上室溫?fù)u動(dòng)3-10分鐘，直至出現(xiàn)比較理想的預(yù)期核酸條帶，搖動(dòng)速度為60-70rpm。
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顯色液配制量 100 ml
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超純水
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89.8 ml
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試劑D-基本顯色液(10×)
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10 ml
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試劑E-顯色加速液(500×)
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0.2 ml
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注：顯色加速液(500X)有刺激性氣味，建議在通風(fēng)櫥內(nèi)操作；
顯色液配制后需在20分鐘內(nèi)使用。
四. 終止步驟：
棄顯色液，加入100 ml MilliQ級(jí)純水，在搖床上常溫?fù)u動(dòng)3-5分鐘，搖動(dòng)速度為60-70 rpm。
五. 保存：
可在MilliQ級(jí)純水中保存；或采用適當(dāng)?shù)姆绞街苽涑筛赡z。
● 常見問題：
一. 背景太深：
1.1 顯色時(shí)間過長(zhǎng)。通常顯色反應(yīng)會(huì)在10分鐘內(nèi)結(jié)束，顯色反應(yīng)時(shí)間過長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致背景很深。
1.2水的純度太低。需使用大于16
MΩ·cm的高純度水。
二. 核酸條帶非常淺：
2.1 染色后水洗滌時(shí)間過長(zhǎng)。在染色溶液染色后需嚴(yán)格控制水洗滌的時(shí)間，水洗滌的時(shí)間不能超過20秒，否則會(huì)導(dǎo)致過多的染色離子被洗去，導(dǎo)致檢測(cè)靈敏度下降。
2.2顯色加速液（500×）失效。顯色加速液（500×）不能低溫保存，低溫保存會(huì)導(dǎo)致加速液失效。
三. 凝膠上出現(xiàn)小點(diǎn)或其它非核酸的痕跡：
3.1 凝膠沒有充分被溶液浸沒。請(qǐng)注意選擇大小合適的容器，并加入足量的各種溶液，同時(shí)需保持適當(dāng)?shù)幕靹蛩俣却_保凝膠可以被溶液浸沒。
3.2 用于染色的容器沒有充分洗滌干凈。容器需先用洗滌劑充分洗滌，隨后用自來水充分沖洗，最后用高純度水再洗滌數(shù)次。該容器最好能專用于染色，并注意避免各種可能的污染。
3.3 指紋或其它壓痕。請(qǐng)注意戴手套操作，切勿直接接觸皮膚。操作時(shí)請(qǐng)注意盡量勿擠壓、折疊或摩擦凝膠。
3.4 有金屬物質(zhì)接觸凝膠。金屬物質(zhì)例如金屬鑷子等接觸凝膠會(huì)出現(xiàn)非特異性痕跡。
實(shí)驗(yàn)記錄表格
實(shí)驗(yàn)日期：
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約25-30分鐘
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標(biāo)記√
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起始時(shí)間
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一 漂洗步驟
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水漂洗
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2×2 min
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二 染色步驟
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染色
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5 min
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水漂洗
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＜1 min
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三 顯色步驟
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顯色
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3-10 min
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四 終止步驟
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水漂洗
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5 min
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五 保存
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實(shí)驗(yàn)示例：
1 雙鏈DNA染色：
2 單鏈DNA/RNA染色：
使用RTS5101 核酸快速高靈敏度染色試劑盒產(chǎn)品發(fā)表部分文章列表：
1. [2022 IF=8.4] A novel label-free
fluorescence aptasensor for dopamine detection based on an Exonuclease III- and
SYBR Green I- aided amplification strategy.
Author：Yanxian
Wang, Kai Kang, Sui Wang,Weijun Kang, Cheng Cheng, Ling Mei Niu，Zhiyong
Guo.
Journal: Sensors and Actuators B: Chemical.
2019, 305:127348
Institution：Ningbo University
Paper link：https://doi.org/10.1016/j.snb.2019.127348
2. [2022 IF=8.4] A robust photoluminescence
screening assay identifies uracil-DNA glycosylase inhibitors against prostate
cancer.
Author：Guodong
Li，Chung-Hang
Leung.
Journal: Chemical Science 2020,
11,1750–1760
Paper link：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC8148385
3. [2022 IF=6.0] A novel resonance Rayleigh
scattering aptasensor for dopamine detection based on an Exonuclease III assisted
signal ampli?cation by G – quadruplex nanowires formation
Author：Yanxian
Wang, Kai Kang, Sui Wang,LiMa, Weijun Kang,Xue Hui Liu, Ling Mei Niu , Zhiyong
Guo
Journal: Arabian Journal of Chemistry (2020)
13, 6598–6605
Institution：Ningbo University
Paper link：https://doi.org/10.1016/j.arabjc.2020.06.016
4. [2022 IF=6] A novel ?uorescent sensor
based on aptamer recognition and DNA walker ampli?cation strategy and its
determination of 17b-estradiol.
Author: Yajun Zhang, Licong Jia, Wei Wang,
Meng Jiang, Hongying Zhang, LingMei Niu
Journal: Arabian Journal of Chemistry. 16
(2023) 105340.
Institution：School of Public Health, Hebei Medical
University
Paper link：https://doi.org/10.1016/j.arabjc.2023.105340
5. [2022 IF=5.1] Repurposing sodium
stibogluconate as an uracil DNA glycosylase inhibitor against prostate cancer
using a time-resolved oligonucleotide-based drug screening platform.
Author: Sang-Cuo Nao, Le-Sheng Huang, Daniel
Shiu-Hin Chan, Xueliang Wang, Guo-Dong Li, Jia Wu, Chun-Yuen Wong, Wanhe Wang,
Chung-Hang Leung
Journal: Bioorganic Chemistry 144 (2024)
107176.
Institution：University of Macau
Paper link：https://doi.org/10.1016/j.bioorg.2024.107176