尿素-SDS-PAGE凝膠快速制備及電泳試劑盒
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貨號
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名稱
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規(guī)格
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RTD6163
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尿素-SDS-PAGE凝膠快速制備試劑盒
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50次
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● 產(chǎn)品組成：
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貨號
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名稱
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規(guī)格
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貯存
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AC2914-02
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40%PAA(29:1)
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100 ml
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4℃
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TS050-01
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4×Tris/SDS分離膠緩沖液 pH8.8
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100 ml
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4℃
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TS030-01
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4×Tris/SDS濃縮膠緩沖液 pH6.8
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50 ml
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4℃
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RU5080
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尿素（電泳級）
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220 克
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RT
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AP020P
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APS（干粉）
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0.5 g
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RT
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TA0761-01
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TEMED
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0.5ml
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4℃，避光
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PL080-01
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5×MonoColor蛋白上樣緩沖液(變性,還原)
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1 ml
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-20℃
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TG120P
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5×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液(變性電泳,粉末型)
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1 L
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RT
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說明書
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一份
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● 貯存、效期及運輸：
按照標簽溫度貯存；有效期一年；常溫運輸。
● 產(chǎn)品簡介：
本公司提供的尿素-SDS-PAGE凝膠快速制備試劑盒包含凝膠制備以及蛋白電泳所需的全部試劑。在SDS-PAGE中尿素作為輔助的變性劑，能與SDS一起徹底變性蛋白，特別是一些跨膜多次的蛋白，尿素輔助SDS可以徹底打開蛋白的高級結(jié)構(gòu)。該產(chǎn)品可以用于Blue Native電泳分離后的二向電泳，也可以用于一些堿性蛋白如組蛋白，魚精蛋白的變性電泳分離。
本試劑盒可配制至少50塊常規(guī)大?。?×10 cm）1mm厚度的PAGE膠。
● 使用說明：
一. 配制分離膠（各試劑使用量請參考表1）
1.1 配制分離膠前，根據(jù)以下配方準備10% APS溶液-5 ml：
將0.5 gAPS干粉溶于5 ml滅菌水中，徹底溶解后分裝，1 ml/支，-20℃?zhèn)浯?，每次取一管使用?0% APS應(yīng)盡量減少常溫存放時間，以防失效。10%APS在4℃有效期為一周，-20℃有效期6個月。若發(fā)現(xiàn)凝膠聚合時間延長，應(yīng)考慮更換使用-20℃保存的10%APS。
1.2按照表1將不同體積的成分在小燒杯或試管中混合；加入10%APS和TEMED，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡。
1.3 在凝膠模具中灌入適量分離膠溶液（對于mini-gel，凝膠液加至約距前玻璃板頂端1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可），然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-5
cm的水層，使凝膠表面保持平整。
1.4 靜置30-60分鐘，待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個清晰的界面后，說明凝膠已聚合。
表1 SDS-PAGE分離膠配方表
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組份
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不同凝膠體積對應(yīng)各組份的取樣量
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6％ 膠
5 ml 10 ml 15 ml 20 ml
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尿素
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1.8
g
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3.6
g
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5.4
g
|
7.2
g
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4×Tris/SDS分離膠buffer
pH8.8
|
1.25 ml
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2.5
ml
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3.75
ml
|
5
ml
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40％ PAA（29:1）
|
0.75 ml
|
1.5
ml
|
2.25
ml
|
3
ml
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H2O
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定容至5ml
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定容至10 ml
|
定容至15 ml
|
定容至20 ml
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TEMED
|
0.005 ml
|
0.01
ml
|
0.015
ml
|
0.02
ml
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10％ APS
|
0.05 ml
|
0.1
ml
|
0.15
ml
|
0.2
ml
|
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8％ 膠 5 ml 10 ml 15 ml 20 ml
|
|
尿素
|
1.8
g
|
3.6
g
|
5.4
g
|
7.2
g
|
|
4×Tris/SDS分離膠buffer
pH8.8
|
1.25 ml
|
2.5
ml
|
3.75
ml
|
5
ml
|
|
40％ PAA（29:1）
|
1 ml
|
2
ml
|
3
ml
|
4
ml
|
|
H2O
|
定容至5ml
|
定容至10 ml
|
定容至15 ml
|
定容至20 ml
|
|
TEMED
|
0.005 ml
|
0.01
ml
|
0.015
ml
|
0.02
ml
|
|
10％ APS
|
0.05 ml
|
0.1
ml
|
0.15
ml
|
0.2
ml
|
|
10％ 膠 5 ml 10 ml 15 ml 20 ml
|
|
尿素
|
1.8
g
|
3.6
g
|
5.4
g
|
7.2
g
|
|
4×Tris/SDS分離膠buffer
pH8.8
|
1.25 ml
|
2.5
ml
|
3.75
ml
|
5
ml
|
|
40％ PAA（29:1）
|
1.25
ml
|
2.5
ml
|
3.75
ml
|
5
ml
|
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H2O
|
定容至5ml
|
定容至10 ml
|
定容至15 ml
|
定容至20 ml
|
|
TEMED
|
0.005 ml
|
0.01
ml
|
0.015
ml
|
0.02
ml
|
|
10％ APS
|
0.05 ml
|
0.1
ml
|
0.15
ml
|
0.2
ml
|
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12％ 膠 5 ml 10 ml 15 ml 20 ml
|
|
尿素
|
1.8
g
|
3.6
g
|
5.4
g
|
7.2
g
|
|
4×Tris/SDS分離膠buffer
pH8.8
|
1.25 ml
|
2.5
ml
|
3.75
ml
|
5
ml
|
|
40％ PAA（29:1）
|
1.5
ml
|
3
ml
|
4.5
ml
|
6
ml
|
|
H2O
|
定容至5ml
|
定容至10 ml
|
定容至15 ml
|
定容至20 ml
|
|
TEMED
|
0.005 ml
|
0.01
ml
|
0.015
ml
|
0.02
ml
|
|
10％ APS
|
0.05 ml
|
0.1
ml
|
0.15
ml
|
0.2
ml
|
|
15％ 膠 5 ml 10 ml 15 ml 20 ml
|
|
尿素
|
1.8
g
|
3.6
g
|
5.4
g
|
7.2
g
|
|
4×Tris/SDS分離膠buffer
pH8.8
|
1.25 ml
|
2.5
ml
|
3.75
ml
|
5
ml
|
|
40％ PAA（29:1）
|
1.875
ml
|
3.75
ml
|
5.625
ml
|
7.5 ml
|
|
H2O
|
定容至5ml
|
定容至10 ml
|
定容至15 ml
|
定容至20 ml
|
|
TEMED
|
0.005 ml
|
0.01
ml
|
0.015
ml
|
0.02
ml
|
|
10％ APS
|
0.05 ml
|
0.1
ml
|
0.15
ml
|
0.2
ml
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二. 濃縮膠制備：
2.1 去除覆蓋在分離膠上的水層。
2.2
按照表2將不同體積成分在一個小燒杯或試管中混合；加入10%過硫酸銨和TEMED，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡。
2.3 將濃縮膠溶液加至分離膠的上面，直至凝膠溶液到達前玻璃板的頂端。
2.4 將梳子插入凝膠內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡。
2.5 靜置30-60分鐘，等待濃縮膠聚合。
表2 SDS-PAGE濃縮膠(4%)配方表
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組份
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不同凝膠體積對應(yīng)各組份的取樣量
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2 ml
|
4 ml
|
5 ml
|
10 ml
|
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尿素
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0.72 g
|
1.44 g
|
1.8 g
|
3.6 g
|
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4×Tris/SDS濃縮膠buffer pH6.8
|
0.5
ml
|
1
ml
|
1.25
ml
|
2.5
ml
|
|
40％ PAA（29:1）
|
0.2
ml
|
0.4
ml
|
0.5
ml
|
1
ml
|
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H2O
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定容至2 ml
|
定容至4 ml
|
定容至5 ml
|
定容至10 ml
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|
TEMED
|
0.002
ml
|
0.004
ml
|
0.005
ml
|
0.01
ml
|
|
10％ APS
|
0.02
ml
|
0.04
ml
|
0.05
ml
|
0.1
ml
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三. 電泳：
3.1 5×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液的配制-1 L：
將一包5×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液干粉全部倒入1L燒杯中，加入約900 ml水徹底溶解，用水定容至1 L，即配成5×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液（此溶液不用調(diào)節(jié)pH值）。用前再稀釋5倍即配成1×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液。
3.2 電泳：
在電泳槽的內(nèi)槽內(nèi)加入1×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液(讓電泳緩沖液漫過加樣孔)，輕輕的撥出梳子，隨后在電泳槽外槽加入適量的1×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液。上樣，電泳，一般是濃縮膠80V，分離膠120V恒壓，等指示前沿溴酚蘭電泳到分離膠下緣后，結(jié)束電泳，染色或者進行下一步實驗。