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離心式去垢劑去除柱
貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
DD0550 |
離心式去垢劑去除柱(處理25-100 μl蛋白樣品) |
10套 |
● 產(chǎn)品組成:
貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
DD0550-01 |
0.5 ml去垢劑去除柱(含套管) |
10套 |
DD0550-02 |
2 ml尖底離心管 |
10個 |
● 產(chǎn)品介紹:
離心式去垢劑去除柱能夠通過離心快速去除蛋白溶液或質(zhì)譜分析中肽段溶液中的常用去垢劑,包括離子型去垢劑,非離子去垢劑和兩性離子去垢劑。在蛋白實驗中,去垢劑在促進蛋白溶解,增加蛋白穩(wěn)定性以及阻止蛋白聚集方面都有重要作用。然而,蛋白溶液中的去垢劑會對下游實驗產(chǎn)生影響,如ELISA,等電聚焦以及質(zhì)譜分析等。在質(zhì)譜分析中,去垢劑會與肽段形成加合離子抑制肽段離子化,導致m/z值的遷移。因此,質(zhì)譜分析中去除肽段溶液中多余的去垢劑是影響分析結(jié)果的重要因素。該去除柱可以高效(>95%)去除樣品中各種常用的去垢劑(濃度范圍1-5%)。
去垢劑去除柱參數(shù)如下:
柱體積 |
填料溶脹后體積 |
處理樣品體積 |
推薦起始樣品濃度 |
去除效率 |
0.5 ml |
~0.6 ml |
25-100 μl |
>0.5 μg/μl |
~95% |
● 貯存、運輸和效期:
4℃貯存(不能冷凍);常溫運輸;有效期1年。
● 操作步驟
一、 去垢劑去除柱預處理:
1.1 取出柱子,放入套管中。
1.2 旋開管蓋,不要擰掉柱子底部堵頭,加入0.4 ml 1×PBS,蓋緊管蓋,常溫靜置2 min,活化填料。
1.3 擰掉柱子底部堵頭,將柱子放入套管中,1000 g 離心1 min,棄流穿液。
注:離心力不要高于1000 g,過高的離心力會損傷填料,降低去垢劑去除效率。
1.4在柱子管蓋上標記填料在柱子內(nèi)的傾斜方向,隨后離心步驟均按同一傾斜方向在離心機內(nèi)放置柱子。
1.5柱子中加入0.4 ml 1×PBS,1000 g 離心1min,棄流穿液。至此,柱子活化結(jié)束,備用。
二、樣品去垢劑去除:
2.1 將柱子轉(zhuǎn)移到2 ml尖底離心管中,加入25-100 μl待處理樣品(樣品濃度高于0.5 μg/μl),常溫靜置2 min。
2.2 1000g 離心2 min,收集離心管內(nèi)樣品。
● 注意事項:
1. 去垢劑去除效果:可以高效的(>95%)去除樣品中各種常用的去垢劑(濃度范圍1-5%)。
去垢劑去除效率和蛋白回收效率 |
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去垢劑 |
濃度 |
去除效率 |
BSA回收效率 (上樣量100 μg) |
SDS |
2.5% |
99% |
95% |
脫氧膽酸鈉 |
5% |
99% |
99% |
CHAPS |
3% |
99% |
90% |
Triton X-100 |
2% |
99% |
87% |
NP-40 |
1% |
95% |
91% |
Brij-35 |
1% |
99% |
97% |
Tween-20 |
0.25% |
99% |
87% |
Octyl glucoside |
5% |
99% |
90% |
2. 樣品處理體積要在柱子處理范圍內(nèi),該去除柱最多處理體積是100 μl樣品,過多會導致收集
管中液體浸沒到去除柱。
3. 當樣品濃度過低時(<0.5 μg/μl),需先將樣品濃縮到所需體積或所需濃度。
● 常見問題:
常見問題 |
可能原因 |
解決方法 |
蛋白回收率偏低 |
蛋白濃度過低(<0.5 μg/μl) |
對蛋白液進行適當濃縮 |
樣品不能流穿 |
未扭掉柱子底部的堵頭 |
按照步驟1.3扭掉堵頭 |
● 實驗示例:
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