Aureobasidin A Solution

金擔子素A溶液 1mg/ml

● 產品包裝：

● Storage：-20℃

Stock solutions may be stored at-20°Cfor up to 12 months

● Specifications:

Appearance:  Colorless, Clear methanol liquid

Sterilization：Filtration

Concentration：1mg/ml in methanol

●    Introduction：

一、關于AbA：

金擔子素A（Aureobasidin A，AbA）是從絲狀真菌Aureobasidium pullulans No. R106中分離出來的環(huán)酯肽類抗生素，具有很強的抗真菌能力。AbA作用機制是抑制酵母中AUR1基因編碼的肌醇磷酰胺（inositol phosphorylceramide，IPC）合成酶的活性，干擾鞘脂合成，從而殺死菌株。AbA在較低的濃度下（0.1-0.5 μg/ml）即可對酵母產生毒性。編碼IPC合成酶的基因研究較多的來自釀酒酵母菌的AUR1基因，以及構巢曲霉的AURA基因，兩者具有同源性。通過對編碼AUR1-C基因進行突變即可使得菌株對AbA產生抗性，作為蛋白質互作研究的報告基因。

因為AbA可以直接殺死敏感的酵母菌株，而不是延遲菌株生長，所以AbA篩選有利于陽性克隆的生長和識別。與營養(yǎng)報告基因（如HIS3）進行低嚴緊度初篩相比，AbA篩選大大消除了背景克隆。實際操作中，用AbA進行初篩時會獲得更多克隆，之后再用4個報告子(AUR1-C,HIS3, ADE2 和MEL1)進行高嚴緊度的二次篩選以驗證陽性克隆。AbA非常適合用作陽性克隆子篩選用的藥物選擇性標記；也是酵母單/雙雜交研究中理想的報告子，可以簡化酵母雙雜交文庫篩選。

二、使用方法：

1.本品為AbA的甲醇溶液，濃度為1 mg/ml，直接用作儲存液。

2.滅菌后YPD Agar培養(yǎng)基冷卻至50-55 ℃，加入適量的AbA儲液，倒板備用。（AbA工作濃度取決于宿主細胞的敏感度，見下表）

3.制備酵母感受態(tài)細胞并完成轉化。

4.把100 μl完成轉化酵母細胞懸液涂到含有適量AbA的YPD Agar培養(yǎng)基平板上，30℃培養(yǎng)2-4天。

5.挑取克隆鑒定，或統(tǒng)計轉化效率。

三、不同菌株建議AbA的工作濃度：

四、對AbA敏感的真菌：

出牙酵母（Saccharomyces cerevisiae）、粟酒裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe）、光滑念珠菌（Candida glabrata）、構巢曲霉（Aspergillus nidulans）和黑曲霉（A. niger.）。