細胞凋亡與壞死檢測試劑盒

●  產品組成：

● 產品簡介：

細胞凋亡與壞死檢測試劑盒(Apoptosis and Necrosis Assay Kit)可以快速檢測細胞凋亡與細胞壞死。本試劑盒采用Hoechst 33342和碘化丙啶(Propidium Iodide，PI)雙染的方法。細胞發(fā)生凋亡時，染色質會固縮。Hoechst 33342可以穿透細胞膜，染色后凋亡細胞熒光會比正常細胞明顯增強。碘化丙啶(PI)不能穿透細胞膜，對于具有完整細胞膜的正常細胞或凋亡細胞不能染色。而對于壞死細胞，其細胞膜的完整性喪失，碘化丙啶(PI)可以染色壞死細胞。上述兩種染料雙染后，使用流式細胞儀或熒光顯微鏡檢測時，正常細胞為弱紅色熒光＋弱藍色熒光，凋亡細胞為弱紅色熒光＋強藍色熒光，壞死細胞為強紅色熒光＋強藍色熒光。

按照每個樣品細胞數(shù)量100萬計算，該試劑盒可以使用100次。

● 貯存：

避光按照標簽溫度保存，一年有效。

● 操作步驟：

一. 貼壁細胞：

1.1在培養(yǎng)液中（細胞數(shù)量控制在10⁶以內）均勻滴加適量的Hoechst 33342染色液和PI染色液，輕柔混勻。例如對于十二孔板中培養(yǎng)的貼壁細胞，每孔有1 ml的培養(yǎng)液，每孔需要加入5 μl Hoechst 33342染色液和5 μl PI染色液。培養(yǎng)液中的血清、酚紅等都不會對染色產生干擾。

1.2混勻，37℃培養(yǎng)15分鐘，直接在顯微鏡下觀察；如果考慮到液體對拍照的乙酰個，可以吸除含染料的培養(yǎng)液，用染色緩沖液洗滌2-3次即可在熒光顯微鏡下觀察。

注：為避免凋亡細胞隨培養(yǎng)液或染色緩沖液被吸除，在吸除液體前，對于用多孔板中培養(yǎng)的細胞，最好用多孔板離心機離心一下以充分沉淀那些已經(jīng)漂浮起來的凋亡細胞。

二. 懸浮細胞：

2.1 在懸浮細胞培養(yǎng)液中加入適量的Hoechst 33342染色液和PI染色液，輕柔混勻。例如對于十二孔板中培養(yǎng)的懸浮細胞，每孔有1 ml的培養(yǎng)液，每孔需要加入5 μl Hoechst 33342染色液和5 μl PI染色液。培養(yǎng)液中的血清、酚紅等都不會對染色產生干擾。

2.2混勻，37℃培養(yǎng)15分鐘，將細胞轉移到1.5 ml離心管中，500 g 離心5分鐘收集細胞。

2.3細胞沉淀用細胞染色緩沖液洗兩遍，每次3分鐘，吸盡液體。洗滌時宜用搖床或手動晃動。

2.4細胞沉淀中加入100 μl 細胞染色緩沖液，重懸沉淀。

2.5取5 μl抗熒光淬滅封片液于載玻片上，加入等體積步驟2.4染色后細胞重懸液，蓋上一潔凈的蓋玻片，盡量避免氣泡。

2.6 熒光顯微鏡下觀察。

注：熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡快檢測。

實驗示例：

293 細胞Hoechst/PI雙染檢測

 操作程序：293細胞胰酶消化后調整細胞密度為1×10⁵/ml。接種到12孔板，1ml每孔，37度5%二氧化碳培養(yǎng)40小時，加入5 μl Hoechst 33342染色液和5 μl 碘化丙啶染色液，37度培養(yǎng)15分鐘，熒光顯微鏡觀察（40×）。